ⅠNуклеїнова кислотаiвступ
Нуклеїнова кислота поділяється на дезоксирибонуклеїнову кислоту (ДНК) і рибонуклеїнову кислоту (РНК), серед яких РНК поділяється на рибосомну РНК (рРНК), месенджерну РНК (мРНК) і транспортну РНК (тРНК) відповідно до її різних функцій.ДНК в основному зосереджена в ядрі, мітохондріях і хлороформі, тоді як РНК в основному розподілена в цитоплазмі.Будучи матеріальною основою експресії генів, екстракція нуклеїнової кислоти відіграє надзвичайно важливу роль у дослідженнях молекулярної біології та клінічній молекулярній діагностиці.Концентрація та чистота екстракції нуклеїнової кислоти безпосередньо впливатимуть на подальшу ПЛР, секвенування, конструювання вектора, розщеплення ферментів та інші експерименти.
Ⅱ Метод виділення та очищення нуклеїнових кислот
① Метод екстракції фенолом/хлороформом
Екстракція фенолом/хлороформом — це класичний метод екстракції ДНК, який переважно використовує два різних органічних розчинника для обробки зразків, розчинення нуклеїнової кислоти на основі ДНК у водній фазі, ліпідів в органічній фазі та білків між двома фазами.Цей метод має переваги низької вартості, високої чистоти та хорошого ефекту.Недоліки - складна експлуатація і тривалий час.
② Метод Тризол
Тризол метод є класичним методом екстракції РНК.Метод Trizol поділяється на водну фазу та органічну фазу після центрифугування з хлороформом, у якому РНК розчиняється у водній фазі, водну фазу переносять у нову пробірку EP, після додавання ізопропанолу отримують осад, а потім очищають етанолом.Цей метод підходить для екстракції РНК з тваринних тканин, клітин і бактерій.
③ Метод очищення відцентрової колонки
Метод очищення центрифужної колонки може адсорбувати ДНК спеціально через спеціальні адсорбційні матеріали кремнієвої матриці, тоді як РНК і білок можуть проходити плавно, а потім використовувати високий рівень солі з низьким рН для поєднання нуклеїнової кислоти, низький рівень солі з високим значенням рН для відділення та очищення нуклеїнової кислоти.Перевагами є висока концентрація очищення, висока стабільність, відсутність потреби в органічному розчиннику та низька вартість.Недоліком є те, що його потрібно центрифугувати крок за кроком, більше операцій.
④ Метод магнітних кульок
Метод магнітних кульок полягає в розщепленні зразка клітинної тканини через лізат, вивільненні нуклеїнової кислоти в зразку, а потім молекули нуклеїнової кислоти спеціально адсорбуються на поверхні магнітної кульки, тоді як домішки, такі як білки та цукри, залишаються в рідина.За допомогою етапів розщеплення клітинної тканини, зв’язування магнітної кульки з нуклеїновою кислотою, промивання нуклеїнової кислоти, елюції нуклеїнової кислоти тощо остаточно отримують чисту нуклеїнову кислоту.Перевагами є проста експлуатація та короткий час використання, без необхідності ступінчастого центрифугування.Він має низькі технічні вимоги та може реалізувати автоматичну та масову роботу.Специфічне поєднання магнітної кульки та нуклеїнової кислоти робить витягнуту нуклеїнову кислоту високої концентрації та чистоти.Недоліком є те, що поточна ринкова ціна відносно висока.
⑤ Інші методи
На додаток до вищезазначених чотирьох методів, існують киплячий крекінг, метод концентрованої солі, метод аніонного миючого засобу, ультразвуковий метод та ферментативний метод тощо.
Ⅲ Тип екстракції нуклеїнової кислоти
Foregene має провідну у світі платформу прямої ПЛР, платформу виділення РНК із подвійною колонкою (тільки ДНК + лише РНК).Основна продукція включає набори для виділення ДНК/РНК, реагенти для ПЛР і прямої ПЛР, серії молекулярних лабораторних реагентів.
① Загальна екстракція РНК
Зразки загальної екстракції РНК включають кров, клітини, тканини тварин, рослини, віруси тощо. Висока чистота та висока концентрація загальної РНК можуть бути отримані шляхом екстракції загальної РНК, яку можна використовувати в RT-PCR, аналізі чіпів, трансляції in vitro, молекулярне клонування, Dot Blot та інші експерименти.
Foregene пов'язаніНабори для виділення РНК
Набір для виділення тотальної РНК тварин--Швидко та ефективно витягуйте загальну РНК високої чистоти та високої якості з різних тканин тварин.
Набір для виділення тотальної РНК клітини--Високоочищену та високоякісну сумарну РНК можна отримати з різних культивованих клітин за 11 хвилин.
Набір для виділення тотальної РНК рослин--Швидко витягуйте високоякісну загальну РНК із зразків рослин з низьким вмістом полісахаридів і поліфенолів.
Набір для виділення вірусної РНК--Швидко виділяйте та очищайте вірусну РНК із таких зразків, як плазма, сироватка, безклітинні рідини організму та супернатанти клітинної культури.
② Екстракція геномної ДНК
Зразки екстракції геномної ДНК включають ґрунт, фекалії, кров, клітини, тканини тварин, рослини, віруси тощо. Екстракція геномної ДНК може бути використана для розщеплення ферментів, побудови бібліотеки ДНК, ПЛР, підготовки антитіл, аналізу гібридизації Вестерн-блот, генного чіпа, високого рівня -пропускна здатність секвенування та інші експерименти.
Foregene пов'язаніНабори для виділення ДНК
Набір для виділення ДНК з тканин тварин--Швидке виділення та очищення геномної ДНК з багатьох джерел, таких як тканини тварин, клітини тощо.
Blood DNA Midi Kit (1-5 мл)--Швидко очистіть високоякісну геномну ДНК з антикоагулянтної крові (1-5 мл).
Набір для виділення ДНК буккального тампона/картки FTA--Швидко очистіть високоякісну геномну ДНК із зразків буккального мазка/картки FTA.
Набір для виділення ДНК рослин--Швидке очищення та отримання високоякісної геномної ДНК із зразків рослин (включаючи зразки рослин із полісахаридів і поліфенолів)
③ Екстракція плазміди
Плазміда - це різновид кільцевої невеликої молекули ДНК у клітинах, яка є звичайним носієм для рекомбінації ДНК.Метод екстракції плазміди полягає у видаленні РНК, відділенні плазміди від геномної ДНК бактерії та видаленні білка та інших домішок для отримання відносно чистої плазміди.
Міні-набір General Plasmid--Швидко очистіть високоякісну плазмідну ДНК від трансформованих бактерій для рутинних експериментів молекулярної біології, таких як трансформація та ферментне травлення
④ Інші типи екстракції, екстракція мікроРНК тощо.
Набір для виділення мікроРНК тварин-- Швидко та ефективно вилучайте невеликі фрагменти РНК 20-200 нт мікроРНК, siRNA, snRNA з різних тканин і клітин тварин
Ⅳ Вимоги до вилучення нуклеїнових кислот і результату очищенняs
① Для забезпечення цілісності первинної структури нуклеїнової кислоти.
② Зменшити взаємодію білків, цукрів, ліпідів та інших макромолекул
③ У зразках нуклеїнових кислот не повинно бути органічних розчинників або високих концентрацій іонів металів, які можуть інгібувати фермент.
④ РНК та інші забруднення нуклеїновими кислотами слід усунути під час екстракції ДНК, і навпаки.
Час публікації: 24 листопада 2022 р
